-o.430A ۴۱۲ + ۰.۲۵۱A ۴۳۱ - ۴.۳۷۶A ۴۶۰ + ۱۳.۲۱۶A480
۳-۶-۲-اثر عصاره آبی برگ گیاه برگ بو بر میزان فعالیت آنزیم گایاکول پراکسیداز استخراج شده از برگ گیاهچه های گندم و شاهی
۳-۶-۲-۱-مواد و محلول های مورد نیاز
در این آزمایش از برگ گیاهچه های ۲۰ روزه، عصاره آبی برگ شاخه غنچه دار گیاه برگ بو، آب مقطر، محلول هیپوکلرید سدیم ۲۰%، محلول ۲/۰ مولار گایاکول، محلول ۰۳/۰مولار H2O2، بافر فسفات ۱/۰ مولار با ۶=pH و کلرید پتاسیم (KCl) جامد استفاده گردید.
۳-۶-۲-۲-آماده سازی گیاهان
گیاهچه ها و غلظت های مختلف عصاره مطابق قسمت ( ۳-۵-۱-۲ ) آماده گردید. در این آزمایش از گیاهچه های ۲۰ روزه جهت استخراج آنزیم گایاکول پراکسیداز استفاده شد.
۳-۶-۲-۳-استخراج آنزیم گایاکول پراکسیداز
ابتدا محلول ۸/۰ مولار کلرید پتاسیم به عنوان بافر استخراج بدین صورت تهیه شد که به ۱۰ میلی لیتر محلول بافر فسفات۱/۰ مولار با ۶=pH ، ۶/۰ گرم کلرید پتاسیم اضافه گردید. سپس یک گرم از بافت تر برگ گیاهچه های ۲۰ روزه را توزین و درون هاون چینی با ۱۰ میلی لیتر از بافر استخراج تهیه شده، هموژنه گردید. محلول هموژنه حاصل درون فالکون ریخته شد و با سرعت ۵۰۰۰ دور در دقیقه توسط دستگاه سانتریفیوژ یخچال دار به مدت ۱۰ دقیقه سانتریفوژ گردید. مایع فوقانی به عنوان عصاره خام حاوی آنزیم گایاکول پراکسیداز مورد استفاده قرار گرفت. این عصاره تا زمان استفاده در یخچال نگاهداری شد. به منظور حفظ فعالیت آنزیم گایاکول پراکسیداز، کلیه مراحل ذکر شده در دمای°C 4+ (درون ظروف یخ) انجام گرفت.
۳-۶-۲-۴-تعیین فعالیت آنزیم
برای اندازه گیری فعالیت آنزیم گایاکول پراکسیداز در گروه های شاهد و تیمار مخلوط واکنش مطابق جدول شماره ( ۳-۱ ) تهیه گردید. تغییرات جذب نور بوسیله دستگاه اسپکتروفتومتر شیمادزو مدل UV-160A در طول موجnm 436 در فواصل زمانی ۱۵ ثانیه ای برای مدت ۵ دقیقه ثبت و با یکدیگر مقایسه گردید. در این آزمایش برای هر کدام از غلظت های ذکر شده ۳ تکرار در نظر گرفته شد و میانگین مقادیر جذب خوانده شده در هر غلظت برای رسم منحنی استفاده شد.
پایان نامه - مقاله - پروژه
جدول۳-۱- مخلوط واکنش جهت سنجش فعالیت آنزیم گایاکول پراکسیداز

 

  بافر استخراج
(ml)		 گایاکول
(M2/0) (μl)		 H2O2
(M03/0) (μl)		 آنزیم
(μl)		 H2O
(μl)
شاهد(کنترل) ۳ ۵۰ ۵۰ — ۱۰۰
تیمار ۳ ۵۰ ۵۰ ۱۰۰ —

تجزیه و تحلیل آماری داده ها
کلیه داده ها با بهره گرفتن از برنامه آماری۲۱ SPSS از طریق آزمون چند دامنه ایDuncan و در سطح ۰۵/۰α= مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. جهت ترسیم نمودارها و منحنی استاندارد از برنامه Excel 2013 استفاده شد.
فصل چهارم
نتایج
۴-۱-پتانسیل آنتی اکسیدانی برگ قسمت های مختلف شاخه گیاه برگ بو با بهره گرفتن از DPPH
شکل ۴-۱ منحنی استاندارد ترولکس بر حسب میکرومول را نشان می دهد. رابطه غلظت های مختلف ترولکس با مقادیر جذب در طول موجnm 515 خطی و R2 برابر ۹۸۱۵/۰ می باشد. از این منحنی به منظور ارزیابی فعالیت آنتی اکسیدانی نمونه ها بر حسب میکرومول ترولکس به ازاء گرم وزن خشک گیاه استفاده گردیده است.
نتایج مربوط به فعالیت آنتی اکسیدانی غلظت های مختلف عصاره متانولی با جذب در طول موجnm 515 در شکل ۴-۲ نشان داده شده است. رابطه (correlation) بین غلظت های مختلف عصاره ی هر قسمت با مقادیر جذب در طول موج فوق خطی و R2 بین ۹۸۴۶/۰الی ۹۹۴۲/۰درصد می باشد.
در جدول ۴-۱ پتانسیل آنتی اکسیدانی عصاره ها بر حسب میکرومول ترولکس بر گرم وزن خشک، مقادیر IC50 برحسب میلی گرم در میلی لیتر و درصد مهار رادیکال های DPPH توسط عصاره متانولی برگ قسمت های مختلف شاخه گیاه برگ بو منعکس گردیده است. همان گونه که در جدول ۴-۱ مشخص شده است پتانسیل آنتی اکسیدانی بین ۸۵۶/۱ ± ۶۷/۴۰ تا ۳۳۳/۰ ± ۶۷/۵۹ میکرومول ترولکس بر گرم وزن خشک می باشد. بیشترین پتانسیل آنتی اکسیدانی مربوط به برگهای شاخه غنچه دار برگ بو (µmol g-1 DW 333/0 ± ۶۷/۵۹ ) می باشد و پس از آن به ترتیب برگ های شاخه بدون میوه و غنچه (µmol g-1 DW 882/0 ± ۶۷/۵۴ ) و سپس برگ های شاخه میوه دار (µmol g-1 DW 856/1 ± ۶۷/۴۰) قرار گرفته اند. همان طور که مشخص است کمترین پتانسیل آنتی اکسیدانی مربوط به برگ های شاخه میوه دار می باشد. از نظر آماری در پتانسیل آنتی اکسیدانی برگ قسمتهای مختلف شاخه گیاه برگ بو اختلاف معنی دار در سطح ۰۵/۰α = مشاهده می شود.
طبق جدول ۴-۱ محدوده مقادیر IC50 بین ۰۱۳/۰ ± ۰۱/۲ تا ۰۵۹/۰ ± ۷۲/۲ میلی گرم در میلی لیتر می باشد. کمترین مقدار IC50 مربوط به برگ های شاخه غنچه دار برگ بو می باشد که مسلماً بیشترین پتانسیل آنتی اکسیدانی را نسبت به برگ های دیگر به خود اختصاص داده است. از نظر آماری بین مقادیر IC50 برگ قسمت های مختلف شاخه گیاه برگ بو اختلاف معنی داری در سطح ۰۵/۰α= مشاهده می شود.

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...