۵
۲
۱
۴۲۵ kb
نگاره ۴-۴- نتایج آزمون PCR در رقم ’Rendz-Vous‘. وجود گیاهان تراریخت میخک با جفت آغازگرهای ژن GUS برای تأیید وجود این ژن. چاهک M نشانگر kb10، چاهک ۱ کنترل منفی، چاهک ۲ تا ۷ نمونه های مربوط به گیاهان تراریخت و چاهک ۸ و ۹ مربوط به گیاهان ناتراریخت

۷
۴
۶
۵
۳
۲
۱
M
نگاره ۵-۴- نتایج آزمون PCR در رقم ’Panamera‘. گیاهان تراریخت میخک با جفت آغازگرهای ژن GUS برای تأیید وجود این ژن. چاهک M نشانگر kb10، چاهک ۱ کنترل منفی، چاهک ۲ تا ۴ نمونه های مربوط به گیاهان تراریخت و چاهک ۵ تا ۷ مربوط به گیاهان ناتراریخت.
نگاره ۶-۴- سنجش ژن GUS در ریزنمونه های پینه (A,B,C) و اندام های گل (D) باززایی شده در رقم ’Rendz-Vous‘.

۴-۴- تأثیر غلظت باکتری

تعداد یاخته های اگروباکتریوم در مایه به عنوان یک عامل حیاتی در کارایی انتقال ژن مورد توجه می باشد. تعداد بیش از حد یاخته های باکتری به یاخته های گیاهی تنش وارد می کند و ممکن است در توانایی باززایی آن ها تأثیر بگذارد. در حالی که غلظت های کم باکتری، فراوانی انتقال T-DNA را کاهش می دهد. کارایی انتقال ژن به صورت تعداد شاخساره­های تراریخت به کل تعداد شاخساره ها در کل ریزنمونه­هایی که مورد آزمایش قرار گرفتند، تعریف شد (Firoozabady et al, 1995).
نتایج نشان می دهد که تفاوت معنی داری بین چگالی نوری۵/۰ و ۸/۰ وجود ندارد ولی با چگالی نوری ۱ دارای اختلاف معنی دار است. نتایج همچنین نشان می دهد که بین دو رقم در چگالی نوری باکتری مختلف تفاوت معنی داری وجود ندارد اما تعداد شاخساره های تراریخت در رقم ’Rendz-Vous‘ بیش از رقم دیگر است. یعنی رقم ’Rendz-Vous‘ کارایی بیشتری برای انتقال ژن با باکتری نسبت به رقم ’Panamera‘دارد. این نتایج را این گونه می توان توجیه نمود که با افزایش تعداد یاخته های باکتری، یاخته های گیاهی که در برابر حمله اگروباکتریوم قرار می گیرند، افزایش می یابد و در نتیجه ممکن است که گیاه در شرایط تنش قرار گیرد و این موضوع بر توانایی آن ها در مراحل بعدی باززایی تأثیر منفی بگذارد. کارایی انتقال ژن با افزایش چگالی نوری باکتری به ۵/۰ افزایش می یابد و با افزایش بیشتر چگالی نوری کاهش می یابد. ساینی و جایوال (Saini and Jaiwal, 2007) گزارش کردند که غلظت های بالاتر اگروباکتریوم می تواند منجر به واکنش حساسیت بیش از حد ریزنمونه ها شود. بنابراین، یک چگالی نوری به نسبت پایینتر هم کارایی انتقال را بهبود می بخشد و نیز رشد بیش از حد اگروباکتریوم را کاهش می دهد. همان گونه که نتایج در جدول ۴-۴ نشان می دهد تعداد شاخساره های تراریخت در چگالی نوری ۱ برای هر دو رقم در مقایسه با دیگر تیمارها کمتر است. این گونه می توان توجیه نمود که با افزایش تعداد یاخته های باکتری در سطح ریزنمونه ها باعث می شود که یاخته های گیاهی بیشتری از آنتی بیوتیک های موجود در محیط کشت انتخابی مصون بمانند، زیرا یاخته های باکتری موجود در سطح ریزنمونه ها ممکن است تا حدودی عمل سمیت زدایی را انجام دهند و محیط پیرامون یاخته های گیاهی در اثر این کار خنثی می شود و می توانند به راحتی به رشد خود ادامه دهند. اختلاف بین دو رقم در میزان باززایی و کارایی تراریزشی می تواند به وسیله اندازه کوچکتر ریزنمونه های برگ در رقم مینیاتور ’Panamera‘ نسبت به رقم استاندارد ’Rendz-Vous‘ شرح داده شود. استوپا و همکاران (Estopa et al, 2001) برای انتقال ژن به ریزنمونه های برگ میخک از چگالی نوری ۱/۰ استفاده کردند. نانتاسواتسری و همکاران (Nontaswatsri et al, 2002) چگالی نوری بین ۴/۰ و ۶/۰ را مناسب ترین غلظت باکتری برای انتقال ژن به ارقام میخک معرفی نمودند.
جدول۴-۴- مقایسه تعداد و درصد شاخساره های تراریخت به دست آمده در تیمار چگالی های نوری مختلف باکتری.