استانداردهای پرولین محلول در فاز تولوئن را به اندازه لازم در کووت دستگاه اسپکتروفتومتر ریخته و مقدار پرولین را در طول موج ۵۲۰ نانومتر قرائت کرده و منحنی استاندارد رسم شد. سپس میزان جذب در نمونه های گیاهی را قرائت نموده و با قراردادن آن در معادله خط مقدار پرولین آمد.
توجه: نمونه‌هاومحلولناین‌هیدرینرادردمای ۴ درجهسانتی‌گرادنگهداری شد.
۳-۴-۳ میزان پتاسیم و سدیم اندام هوایی گیاه
توسط دستگاه فتومتر به روش چاپمن وهمکاران(۱۹۸۲)اندازه‏گیری شد.
۳-۴-۴ شاخص کلروفیل (عدد اسپد) برگ
میزان کلروفیل برگ در مرحله ابتدای گلدهی با بهره گرفتن از دستگاه کلروفیل متر دستی (اسپد) اندازه گیری شد. بدین منظور از هر کرت سه بوته، و از هر بوته، آخرین برگ توسعه یافته انتخاب شده و از آن برگ از سه نقطه جداگانه عدد اسپد قرائت شد و سپس میانگین نه عدد قرائت شده به عنوان عدد اسپد در آن کرت در نظر گرفته شد.
۳-۴-۵میزان کلروفیل
برای اندازه‏گیری میزان کلروفیل به روش آرنون به طریقه زیر عمل شد (آرنون، ۱۹۶۷ به نقل از حسیبی، ۱۳۸۶):

 ۱ – مقدارنیمگرمازمادهترگیاهیدرهاونچینیریخته،سپسبااستفادهازنیتروژنمایعخردکردهوبهخوبی له شد.
۲- ۲۰میلیلیتراستن ۸۰٪بهنمونهاضافه،سپسدردستگاهسانتریفیوژباسرعت۶۰۰۰ دوردردقیقهبه­مدت ۱۰ دقیقهقرار گرفت. عصارهجداشدهفوقانیحاصلازسانتریفیوژبهبالنشیشه‏ایمنتقلشد.
۳- مقداری از نمونه داخل بالن در کووت اسپکتروفتومتر ریخته و سپس به طور جداگانه در طول موج های ۶۶۳ نانومتر برای کلروفیل a، ۶۴۵نانومتربرایکلروفیلb و ۴۷۰ برای کارتنوئیدها توسط اسپکتروفتومتر مقدار جذب قرائت شد.
۳۸
۴- در نهایت با بهره گرفتن از فرمول‏های زیر میزان کلروفیل a ، b و کاروتنوئیدها بر حسب میلی گرم بر گرم وزن تر نمونه به­ دستآمد.
Chlorophyll a = (19.3 _* A663 - 0.86 _* A645) V/100W
Chlorophyll b = (19.3 _* A645 - 3.6 _* A663) V/100W
Carotenoides = 100(A470) - ۳٫۲۷(mg chl. a) - 104(mg chl. b)/227
که در آن:
V= حجم محلول صاف شده (محلول فوقانی حاصل از سانتریفیوژ)
A= جذب نور در طول موج­های ۶۶۳، ۶۴۵ و ۴۷۰ نانومتر
W= وزن تر نمونه بر حسب گرم بود (شکل ۳-۲).

شکل ۳-۲ مراحل اندازه‏گیری کلروفیل
۳۹
۳-۴-۶شاخص سطح برگ
با بهره گرفتن از دستگاه سطح برگ‌سنج انجام شد.
شکل۳-۳ اندازه گیری سطح برگ
۳-۴-۷پایداری غشای سلولی
میزان نشت الکترولیتی برگ‌هابه روش لوتوس وهمکاران(۱۹۹۶)وبا استفاده از دستگاه هدایت الکتریکی تعیین شد بدین ترتیب که بر اساس این روش نمونه‌های تهیه شده از جوان‏ترین برگ توسعه یافته به آزمایشگاه انتقال و با بهره گرفتن از پانچ از هر برگ، دیسک‌های دایره‌ای و با قطر نیم سانتی‌متر تهیه شد. قطعات حاصل بعد از آنکه سه مرتبه با آب مقطر شسته، به لوله‌های آزمایش حاوی ۱۰ میلی‌لیتر آب مقطر انتقال یافت. این نمونه‌ها در دمای آزمایشگاه بر روی شیکر با ۱۰۰ دور در دقیقه برای مدت ۲۴ ساعت قرار داده شد و EC1 آن‏ها با بهره گرفتن از دستگاه هدایت الکتریکی تعیین شد. سپس نمونه‌ها در اتوکلاو با دمای ۱۲۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ دقیقه قرار گرفت و بعد از اندازه‏گیری EC2، میزان EL نمونه‌های مختلف با بهره گرفتن از رابطه EC2/EC1 تعیین شد(به نقل از تونا وهمکاران، ۲۰۰۸).
۴۰
۳-۴-۸درصد رطوبت نسبی برگ
از هر واحد آزمایشی تعداد ۳ عدد برگ انتخاب و بلافاصله به آزمایشگاه منتقل و سپس به قطعات ۲ سانتی‌متری تقسیم و با دقت ۰۰۱/۰ گرم توزین شد (FW). سپس این قطعات به منظور تعیین وزن تورژسانس به مدت ۴ ساعت در شدت نور کم در داخل آب مقطر قرار داده و سپس وزن اشباع آن‏ها اندازه‌گیری شد ( .(SW در نهایت این برگ‌ها به مدت ۴۸ ساعت در دمای ۷۵ درجه سانتی‌گراد در آون نگهداری و سپس وزن خشک آن‏ها تعیینگردید(DW)(به نقل از توناوهمکاران، ۲۰۰۸).
درصد رطوبت نسبی برگ با بهره گرفتن از رابطه زیر محاسبه شد:
%RWC=(FW-DW/SW-DW)*100
۳-۴-۹اندازه‏گیری ارتفاع بوته:
بعد از کف‏بر کردن بوته‏ها از گلدان، ارتفاع بوته‏ها با متر اندازه‏گیری شد.
۳-۵محاسبات آماری
محاسبات آماری با بهره گرفتن از نرم افزار SAS، همچنین مقایسه میانگین‌ اثرات اصلی به روش آزمون LSD، در سطح ۵ درصد انجام شد و در صورت معنی‌دارشدن اثرات اصلی، با بهره گرفتن از تجزیه رگرسیونی داده‌ها بررسی ‌شد و چنانچه اثر متقابل سالیسیک اسید و شوری معنی‌دار شد، از بررسی جداگانه اثر اصلی فاکتور‌ها خودداری شده و به جای آن، تنها اثر متقابل فاکتورها برش‌دهی ‌شدند. مقایسه میانگین ترکیبات تیماری هم به وسیله آزمون LSD در سطح احتمال خطای ۵ درصد انجام ‌شد و رسم نمودارها با بهره گرفتن از نرم افزار Excel انجام شد.
۴۱
فصل چهارم
نتایج و بحث